Luigi denkt een fantastische vakantie te gaan beleven met Mario en zijn vrienden. Zijn droom loopt echter al snel uit op een nachtmerrie. Mario en de anderen worden namelijk gevangengenomen. Luigi zal zijn angst opzij moeten zetten om ze te redden. Gelukkig wordt onze held op sokken wederom bijgestaan door professor K. Wibus. Gewapend met de nieuwe Spookzuiger G-00 moet de groene angsthaas zich een weg zien te banen door een hotel vol eigenaardige kamers en onderweg allerlei spoken verslaan. Als je niet voorbij een bepaald obstakel kunt komen, kun je Gooigi oproepen. Deze groene dubbelganger beschikt over unieke vaardigheden waarmee je Luigi uit de brand kunt helpen.